1.PCR产物无法扩增
问题描述:PCR反应结束后,检测不到目标DNA的扩增产物。
解决方法:
(1)检查引物设计是否正确,确保引物序列与目标DNA配对良好。
(2)检查模板DNA质量和浓度,可能需要重新提取或稀释模板。
(3)调整PCR反应条件,包括温度、时间和引物浓度等参数。
2.出现非特异性扩增
问题描述:PCR反应中出现了非特异性扩增产物。
解决方法:
(1)检查引物设计,确保引物与非目标序列不匹配。
(2)优化PCR条件以提高特异性,如调整温度梯度或优化引物浓度。
(3)进行质控实验,验证PCR产物的特异性。
3.出现污染
问题描述:PCR反应中出现了外源DNA污染。
解决方法:
(1)使用无菌技术操作,并确保所有仪器和试剂都已消毒。
(2)分开处理样品以避免交叉污染。
4.PCR反应效率低
问题描述:PCR反应效率较低,扩增产量不足。
解决方法:
(1)检查酶活性是否正常,可能需要更换新酶或提高酶浓度。
(2)确保所有试剂均匀混合,并避免结块或沉淀形成。
染料法PCR试剂盒
http://www.fsbio-e.com/SonList-1986120.html
https://www.chem17.com/st391834/erlist_1986120.html